茶多糖是茶葉中一種具有生理活性的多糖，由糖類、果膠和蛋白質(zhì)等組成，是一種酸性糖蛋白，并結(jié)合有大量的礦質(zhì)元素。其中，糖的部分主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、巖藻糖等組成，蛋白質(zhì)部分主要由20種左右常見的氨基酸組成，礦質(zhì)元素主要由鐵、鈣、鎂、錳等，以及少量的微量元素，如稀土元素等組成。茶多糖具有多種生理活性，如抗氧化、免疫活性、降血糖、抗癌等，是茶葉中極具開發(fā)價(jià)值的一種生理活性物質(zhì)，在醫(yī)藥和食品方面有廣闊的研發(fā)前景。

本文就近幾年綠茶多糖的提取、分離純化、生物活性研究等方面進(jìn)行綜述，為綠茶在醫(yī)藥及保健品等多方面的綜合利用提供理論依據(jù)。

一、綠茶多糖的提取技術(shù)

(資料圖)

綠茶多糖提取方法主要有水浸提法、酶提取法、微波提取法、超聲波提取法及酸、堿提取法等，其中，酸、堿提取法對(duì)提取條件要求高，目前應(yīng)用較少。近年來，研究人員對(duì)綠茶多糖的提取進(jìn)行了大量的研究，由于大多數(shù)生物活性多糖在性質(zhì)上是極性的，因此提取多糖時(shí)常使用熱水和熱堿溶液等極性溶劑。目前綠茶多糖應(yīng)用最多的提取技術(shù)為水浸提法，其次為酶提取法、微波提取法。超臨界萃取技術(shù)、反膠束萃取技術(shù)以及復(fù)合提取技術(shù)等還未見在綠茶多糖的提取中應(yīng)用。各提取方法的提取率從高到低依次為微波提取法、酶提取法、超聲波提取法、水浸提法。由于綠茶的品種不同、產(chǎn)地不同、采摘時(shí)間不同，提取率也不相同，影響綠茶多糖提取率的因素還有茶樹的生長(zhǎng)環(huán)境、樹齡、加工工藝、鮮葉成熟度等。研究果膠酶和單寧酶同時(shí)處理對(duì)綠茶中多糖提取的影響，發(fā)現(xiàn)同時(shí)處理是一種有效的提取多糖的方法，并且能顯著增強(qiáng)其清除自由基的活性。

由于不同提取方法得到的綠茶多糖可能存在結(jié)構(gòu)、生物活性等的不同，因此，可以根據(jù)所需生物活性的要求，選擇不同的提取方法。

二、綠茶多糖的分離純化技術(shù)

通過不同的提取方法得到的綠茶粗多糖，需要通過脫蛋白、脫色、純化等步驟，才能進(jìn)一步研究其化學(xué)結(jié)構(gòu)、作用機(jī)理、構(gòu)效關(guān)系等。

1、綠茶多糖的脫蛋白

綠茶多糖脫蛋白一般采用Sevage法、三氯乙酸法和層析法，目前已有大量關(guān)于這3種脫蛋白工藝的報(bào)道。例如，杜景東等研究了云霧綠茶多糖提取方法的優(yōu)化以及Sevage法除蛋白的最佳工藝；王傳名等研究日照綠茶粗多糖的脫蛋白工藝，研究結(jié)果表明：三氯乙酸法的脫蛋白效果最好，脫蛋白后茶多糖溶液pH為4.0，茶多糖含量為72.5%，茶多糖保留率為66.8%，蛋白脫除率為68.4%。任健研究了信陽(yáng)毛尖多糖的除蛋白方法，他提出利用蛋白水解酶處理后再用Sevage法除蛋白，其提取率比單用Sevage法提高很多。陳義勇等采用Sevage法、三氯乙酸法和聚酰胺吸附柱層析法進(jìn)行脫蛋白效果比較，研究結(jié)果表明，聚酰胺吸附柱層析法脫蛋白效果最好，蛋白脫除率為94.5％，多糖保留率為91.4％；而三氯乙酸法會(huì)引起多糖降解，蛋白脫除率為40.8％，多糖保留率僅為47.2％，Sevage法脫除蛋白次數(shù)最多，多糖損失大，蛋白脫除率為72.7％，多糖保留率為55.8％。綜上所述，茶多糖除蛋白工藝需要根據(jù)原料的不同不斷進(jìn)行優(yōu)化，而非簡(jiǎn)單借鑒。

2、綠茶多糖的脫色

綠茶多糖在提取過程中，存在大量色素，影響進(jìn)一步的分離純化。要采取一定方法除去色素，改善綠茶多糖的外觀，從而為結(jié)構(gòu)及構(gòu)效關(guān)系的研究奠定基礎(chǔ)。關(guān)于綠茶多糖脫色方法的研究，已有很多報(bào)道。例如，任健的研究結(jié)果表明活性炭脫色法會(huì)吸附多糖造成損失，采用H2O2脫色法為粗多糖進(jìn)行脫色較為合適；陳萍等對(duì)粗老龍井茶多糖脫色時(shí)發(fā)現(xiàn)，采用H2O2脫色法進(jìn)行脫色后，茶多糖的活性會(huì)降低；王元鳳的研究結(jié)果表明采用D315樹脂脫色效果好，而且還兼有脫蛋白的作用，在脫色條件為溫度35～55℃，酸堿度4.5～6.5時(shí)，茶多糖溶液的脫色率可達(dá)到89.82％，蛋白質(zhì)去除率為93.95％，多糖保留率為64.86％；陳義勇等采用聚酰胺、粉末活性炭、吸附樹脂對(duì)綠茶粗多糖進(jìn)行脫色，研究結(jié)果表明聚酰胺吸附柱層析法脫色效果最好。

3、綠茶多糖的純化技術(shù)

綠茶多糖的純化方法有沉淀法、超濾法、鹽析法、柱層析法等。目前，研究最多的是DEAE-52纖維素柱層析和SephadexG-100凝膠柱層析兩種方法。陳海霞以低檔綠茶中提取到的茶粗多糖為原料，采用DEAE-52纖維素柱層析進(jìn)行純化，經(jīng)水和0.1mol/L、0.2mol/L、0.5mol/L的NaCl溶液梯度洗脫后，得到TPS-1、TPS-2、TPS-3和TPS-4等4個(gè)組分；周宇波采用水熱法對(duì)中茶108粗老葉中的茶多糖進(jìn)行提取，采用DEAE-52纖維素柱進(jìn)行純化，用蒸餾水及不同濃度的NaCl溶液依次進(jìn)行分段洗脫，得到5個(gè)亞組分，分別命名為F0、F0.1、F0.2、F0.3和F0.4；寇小紅從龍井43茶樹粗老葉中提取的粗多糖，經(jīng)過不同孔徑的超濾膜進(jìn)行初步純化，截留液經(jīng)過DEAE-52纖維素離子交換層析純化后，得到8個(gè)不同的分級(jí)組分，其中，5個(gè)酸性多糖和3個(gè)中性多糖，再經(jīng)過丙烯葡聚糖凝膠SephacrylS-300柱層析系統(tǒng)進(jìn)行純化，得到14個(gè)組分。綜上所述，在所有的常用純化技術(shù)中，DEAE-52纖維素離子交換層析純化方法效果最好，但是其純化效果亦與原料有關(guān)。

三、綠茶多糖的結(jié)構(gòu)組成

如前所述，綠茶多糖的糖的部分主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、巖藻糖等組成，大量研究結(jié)果表明茶樹品種和產(chǎn)地均會(huì)影響多糖中單糖的組成。經(jīng)氣相色譜分析得到單糖組成，結(jié)果詳見表1。

另有研究結(jié)果表明，不同提取工藝、脫色方法和純化技術(shù)等對(duì)多糖中單糖的組成影響不大。

四、綠茶多糖的生物活性研究

近年來，科研人員對(duì)綠茶多糖生物活性進(jìn)行了大量研究，主要研究了綠茶多糖的抗氧化、降血糖、抗腫瘤、提高免疫力等方面。

1、抗氧化

綠茶多糖具有較強(qiáng)的抗氧化能力，對(duì)預(yù)防心腦血管疾病和延緩衰老具有重要作用。其抗氧化能力主要通過清除自由基、對(duì)脂類的氧化抑制和對(duì)鐵離子的還原能力等來反映。目前，綠茶多糖抗氧化活性的評(píng)價(jià)，主要通過超氧陰離子自由基、羥自由基和亞硝基等體外清除活性及鐵離子的還原能力來進(jìn)行研究。例如，尹學(xué)哲等研究表明，綠茶多糖對(duì)ROO·、O2-·、·OH及H2O2均有清除作用；受試者食用綠茶多糖后，血漿及VLDL、LDL和HDL過氧化脂質(zhì)水平明顯降低，在體外進(jìn)行氧化修飾時(shí)，LDL氧化延滯時(shí)間明顯延長(zhǎng)。研究結(jié)果提示，綠茶多糖可增強(qiáng)血漿及脂蛋白抗氧化能力，起到預(yù)防心血管疾病和延緩衰老的作用。陳萍等采用不同濃度的乙醇從龍井粗老茶葉中提取到的組分TPS70抗氧化效果好且得率高，在體外模擬人工胃液環(huán)境中，組分TPS70降解為還原糖和寡糖片段，降解片段穩(wěn)定在120ku左右。Fan等采用陰離子交換樹脂D315將提取的茶多糖分離成中性茶多糖和酸性茶多糖，并對(duì)這兩種茶多糖進(jìn)行脫金屬離子處理后測(cè)定其抗氧化能力。結(jié)果表明，所有茶多糖均表現(xiàn)出不同程度的抗氧化活性，其中去除金屬離子的TPSI抗氧化活性得到大幅提升。Ren等通過研究紫陽(yáng)含硒綠茶SeTPS對(duì)小鼠肝氧化應(yīng)激的影響發(fā)現(xiàn)，飼喂SeTPS組的小鼠肝臟脂肪變性和氧化應(yīng)激損傷明顯減輕，抗氧化性和肝脂水平均恢復(fù)到正常值。

2、降血糖

國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)茶多糖具有顯著的降低血糖的作用，并且茶葉越粗老血糖降低效果越好。俞東寧等從粗老龍井茶葉中采用水浸提法提取多糖，組分TPS70抗氧化效果最強(qiáng)，而且對(duì)糖尿病小鼠的脂多糖升高有顯著的抑制作用。賈亮亮等分別采用酶法、熱水提取法和冷水提取法提取了鄂產(chǎn)綠茶的茶多糖，結(jié)果表明3種提取方法獲得的綠茶多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用無明顯差別；酶法提取的綠茶多糖對(duì)α-淀粉酶和蔗糖酶活性的抑制作用強(qiáng)于熱水提取法、冷水提取法所得的綠茶多糖，具有較好的體外降血糖活性。鐘靈等的研究結(jié)果表明，恩施綠茶茶多糖能明顯降低糖尿病大鼠血糖，增強(qiáng)超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、肝葡萄糖激酶的活性，減少血清中丙二醛的含量，升高脾臟、胸腺系數(shù)，具有降血糖、抗氧化和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用。Wang等研究表明，綠茶中的一種水溶性茶多糖7WA在高葡萄糖水平時(shí)能夠顯著增加胰島素分泌，從而起到良好的抗糖尿病的作用。綜上所述，茶多糖降血糖的機(jī)理主要有：①降低由四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖糖度；②減輕四氧嘧啶對(duì)小鼠胰島的損傷，改善受損β細(xì)胞的功能；③清除自由基，提高肝臟抗氧化能力；④調(diào)節(jié)糖代謝。

3、抗癌、抗腫瘤

茶多糖的抗癌、抗腫瘤活性主要通過激活機(jī)體免疫系統(tǒng)和提高機(jī)體免疫功能來增強(qiáng)抗腫瘤能力。何念武等采用熱水浸提-乙醇沉淀法制得商洛綠茶粗多糖，經(jīng)DEAE-52纖維素柱分離后得到3個(gè)組分，并發(fā)現(xiàn)3個(gè)組分均可抑制MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)，其抑制作用隨著質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)?？苄〖t從炒青綠茶中提取的粗多糖，分子量在20kD左右的組分對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞系Raw264.7有顯著免疫活性。周宇波發(fā)現(xiàn)中茶108中性多糖F0.1～F0.3能顯著抑制HeLa細(xì)胞的增殖，最高抑制率為10.43%，酸性茶多糖F0能顯著促進(jìn)HeLa細(xì)胞增殖。夏道宗等發(fā)現(xiàn)安吉白茶多糖在體外能顯著抑制S180細(xì)胞的生長(zhǎng)，并且具有明顯的劑量依賴效應(yīng)；在體內(nèi)，安吉白茶多糖可使荷S180實(shí)體瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力顯著升高。Liu等利用偶氮甲烷/葡聚糖硫酸鈉小鼠模型和IL-6誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌細(xì)胞系研究了TPS對(duì)CaC的抗腫瘤作用，結(jié)果表明TPS能夠通過平衡細(xì)胞微環(huán)境，顯著降低腫瘤發(fā)生率和腫瘤大小，并顯著抑制促炎細(xì)胞的浸潤(rùn)和促炎細(xì)胞因子的分泌。Gao等通過研究中茶108中茶多綠茶多糖抑制腫瘤生長(zhǎng)的具體機(jī)理為促進(jìn)巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的成熟、分化和繁殖，產(chǎn)生各種細(xì)胞因子，使腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)受到抑制或引起腫瘤細(xì)胞的凋亡。

五、存在問題和發(fā)展前景

綠茶的研究主要集中在茶多酚和兒茶素的開發(fā)和利用方面，綠茶多糖的研究相對(duì)薄弱，商品化程度低。近年來，綠茶多糖的多種保健功能不斷揭示，國(guó)內(nèi)外的研究報(bào)道逐漸增多。但是，綠茶多糖的提取技術(shù)尚不成熟，得率和純度不高，無法滿足工業(yè)化生產(chǎn)的需求。并且，綠茶多糖的生物活性、結(jié)構(gòu)、構(gòu)效關(guān)系等尚沒有科學(xué)結(jié)論，還沒有制定引導(dǎo)綠茶多糖行業(yè)規(guī)范化發(fā)展的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。隨著綠茶多糖的價(jià)值被逐漸認(rèn)識(shí)，其在醫(yī)藥、食品保健等行業(yè)中已有應(yīng)用和開發(fā)?！安瓒嗵桥蒡v片”“復(fù)方硒茶多糖”“茶多糖膠囊”等初級(jí)茶多糖保健產(chǎn)品已進(jìn)入市場(chǎng)，由此可見綠茶多糖的研究大有可為。

我國(guó)是世界第一大茶葉生產(chǎn)國(guó)，茶葉資源十分豐富。在茶葉生產(chǎn)中，特別是綠茶目前一般只采摘春茶，而每年茶樹修剪后的粗老枝葉通常被焚燒或者廢棄，造成資源的浪費(fèi)。茶多糖具有治療糖尿病、抗癌等重要的生物活性，并且茶樹粗老葉中茶多糖的含量高于新葉。因此，隨著對(duì)茶多糖研究的深入，充分利用茶樹資源，提高茶葉生產(chǎn)的附加值和茶樹資源利用率，對(duì)我國(guó)的茶產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展具有深遠(yuǎn)的意義。